南方医科大学深圳医院丨银杏黄酮 GK 靶向 Ube3c-Laptm5-TBK1 轴,调控巨噬细胞自噬缓解脓毒症肺损伤

研究设计

建立 LPS 与 CLP 诱导的 SI-ALI 小鼠模型及 RAW264.7 巨噬细胞模型，先验证 GK 对 SI-ALI 的保护作用，再探究其抗炎、抗氧化效应及对巨噬细胞自噬的影响，通过蛋白质组学筛选关键靶蛋白 Laptm5，验证 Laptm5 在 GK 调控自噬与炎症中的作用，进一步探索 GK 调控 Laptm5 的分子机制，明确其泛素化修饰及关键 E3 连接酶，最终解析完整信号轴并验证靶点与结合位点。

研究结果

GK 可显著减轻 SI-ALI 小鼠肺组织病理损伤、降低炎症因子水平与氧化应激，在巨噬细胞中通过 NF-κB 与 Nrf2 通路发挥抗炎抗氧化作用；GK 能浓度依赖性提升自噬流，促进 TBK1 自噬降解以抑制炎症；GK 通过上调 Laptm5 蛋白水平加速 TBK1 溶酶体途径降解，且不影响 Laptm5 的 mRNA 水平，而是特异性抑制 Laptm5 的 K48 位泛素化，首次确定其泛素化位点为 K86 和 K122；GK 可直接结合 E3 泛素连接酶 Ube3c 的 TYR707 与 ASN832 位点，削弱 Ube3c 与 Laptm5 的相互作用，进而抑制 Laptm5 泛素化、稳定其蛋白表达，最终通过 Ube3c-Laptm5-TBK1 轴实现促自噬与抗炎效果。

Fig.1：在小鼠体内证实 GK 可剂量依赖性改善 LPS/CLP 诱导的 SI-ALI，减轻肺组织病理损伤、减少巨噬细胞浸润、降低血清炎症因子水平。

Fig.2：GK 可抑制 SI-ALI 小鼠肺组织炎症通路蛋白表达、降低炎症基因水平，并激活 Nrf2 通路缓解氧化应激。

Fig.3：体外确认 GK 在安全浓度下可抑制 LPS 诱导的巨噬细胞炎症因子释放、NF-κB 通路激活，并改善氧化应激与线粒体膜电位。

Fig.4：GK 通过促进巨噬细胞自噬流、介导 TBK1 自噬降解，进而抑制 NF-κB 通路与炎症反应，自噬抑制剂可逆转该效应。

Fig.5：蛋白质组学筛选发现 GK 显著上调 Laptm5，敲低 Laptm5 会削弱 GK 促自噬、降解 TBK1 及抗炎的作用，证实 Laptm5 为关键介导蛋白。

Fig.6：GK 在翻译后水平稳定 Laptm5，特异性抑制其 K48 位泛素化，明确 K86 与 K122 为 Laptm5 的关键泛素化位点。

Fig.7：筛选并验证 Ube3c 是 GK 的直接靶点，GK 结合 Ube3c 的 TYR707 与 ASN832 位点，阻断 Ube3c 介导的 Laptm5 泛素化，进而发挥生物学效应。